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細胞凋亡檢測的常用檢測方法有這幾種

更新時間:2022-04-19點擊次數:1750
  要了解細胞凋亡檢測方法,首先要了解細胞凋亡的形態學變化,形態學觀察表明細胞凋亡的變化是多階段的。細胞凋亡往往涉及多個細胞,甚至少數細胞也異步發生。首先細胞體積縮小,連接消失,與周圍細胞分離,然后細胞質密度增加,隨后會發生一系列變化:線粒體膜電位消失;滲透率變化;將細胞c釋放到細胞質中;核質濃度、核膜和核仁碎裂;DNA被降解成180bp-200bp左右的片段,在細胞膜內形成囊泡;絲氨酸膜表面轉向磷脂膜內側;細胞膜結構仍然完好無損。可以將凋亡細胞的殘骸分割包裹成若干個凋亡小體而不會溢出。
  
  細胞凋亡檢測通常包括形態學觀察、DNA凝膠電泳、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、核小體試驗、流式細胞術和Westernblot檢測。
  
  1、形態觀察
  
  電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮和邊緣聚集,常呈新月形,核膜皺縮,細胞質致密,細胞器集中,膜泡或“芽”和凋亡小體和凋亡小體被相鄰的吞噬細胞吞噬。
  
  2、DNA凝膠電泳
  
  細胞凋亡的主要生化特征是染色質凝聚。染色質DNA在核小體單元之間的連接處斷裂,形成一個180~200bp的整數寡核苷酸片段。該方法是判斷細胞是否發生凋亡的簡單方法,更適用于體外培養的非增殖細胞的檢測。
  
  3、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)核小體試驗
  
  凋亡細胞的DNA斷裂導致細胞質中出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片段組成,可通過ELISA檢測。
  
  細胞凋亡檢測步驟:
  
  (1)將凋亡細胞裂解并高速離心,上清液中含有核小體;
  
  (2)微量定量板上吸附組蛋白;
  
  (3)此外,抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合;
  
  (4)辛辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體與核小體上的DNA結合;
  
  (5)酶加底物,光度吸收值。
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